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紫外可見分光光度計(jì)原理
更新時(shí)間:2010-07-26   點(diǎn)擊次數(shù):4512次
  紫外可見分光光度計(jì)是由于分子中的某些基團(tuán)吸收了紫外可見輻射光后,發(fā)生了電子能級(jí)躍遷而產(chǎn)生的吸收光譜。它是帶狀光譜,反映了分子中某些基團(tuán)的信息??梢杂脴?biāo)準(zhǔn)光圖譜再結(jié)合其它手段進(jìn)行定性分析。
  根據(jù)Lambert-Beer定律:A=εbc,(A為吸光度,ε為摩爾吸光系數(shù),為液池厚度,c為溶液濃度)可以對(duì)溶液進(jìn)行定量分析。
  你可以用紫外可見分光光度計(jì)測(cè)定定三種農(nóng)藥的波長(zhǎng)在某溶液中的zui大、zui小吸收波長(zhǎng)。
  配制溶液-在光譜檢測(cè)項(xiàng)下進(jìn)行-調(diào)整檢測(cè)光譜范圍及速度--掃描光譜圖--吸光度zui大處對(duì)應(yīng)波長(zhǎng)為zui大吸收波長(zhǎng),吸光度zui小處對(duì)應(yīng)的波長(zhǎng)為zui小吸收波長(zhǎng)。
  UV765紫外可見分光光度計(jì)操作規(guī)程
  一、開機(jī)
  開機(jī)前將樣品室內(nèi)的干燥劑取出,確認(rèn)電源是否連接。打開儀器電源開關(guān),等待儀器自檢通過,自檢過程中禁止打開樣品室。
  二、使用
  自檢結(jié)束后(7個(gè)項(xiàng)目均出現(xiàn)OK字樣),儀器進(jìn)入主菜單,屏幕顯示如下七個(gè)功能項(xiàng):1.光度測(cè)量;2.光譜測(cè)量;3.定量測(cè)量;4.動(dòng)力學(xué)測(cè)量;5.數(shù)據(jù)處理;6.多波長(zhǎng)測(cè)定;7.系統(tǒng)狀態(tài)設(shè)定。儀器經(jīng)30min熱穩(wěn)定后,就可以進(jìn)入正常測(cè)量。
  1.光度測(cè)量測(cè)定一定波長(zhǎng)下的透光率(T%)或吸光度值(A)
  在主菜單中選中[光度測(cè)量]項(xiàng)后,按[ENTER]鍵進(jìn)入此功能塊→按[GOTOWL]鍵進(jìn)入波長(zhǎng)設(shè)置用數(shù)字鍵輸入你所需的波長(zhǎng)值→按[ENTER]鍵確認(rèn)→屏幕提示:請(qǐng)稍等……,儀器自動(dòng)將波長(zhǎng)移動(dòng)到你所需測(cè)定的波長(zhǎng)值→按[F1]鍵,選擇測(cè)定透光率(T%)或吸光度值(A)→打開樣品室蓋,將空白溶液和待測(cè)樣品分布放置比色皿架R位和S1位,關(guān)上樣品室蓋→按[F3]鍵,儀器自動(dòng)將比色皿架R位置移動(dòng)到光路中(即空白溶液),屏幕上顯示Cell=R→按[AUTOZERO]鍵,儀器自動(dòng)對(duì)空白溶液調(diào)零。屏幕提示:請(qǐng)稍等……→按[F2]鍵,比色皿架移動(dòng)到S1位(待測(cè)樣品),屏幕上顯示Cell=S1→按[F4]鍵測(cè)量T%或A值
  測(cè)量完成后
  1)打印輸出數(shù)據(jù),按[START/STOP]鍵
  2)返回主菜單,按[MODE]鍵
  2.光譜測(cè)量波長(zhǎng)掃描或光譜掃描,可直接測(cè)定一段波長(zhǎng)范圍內(nèi)的光譜圖和峰值谷值數(shù)據(jù)
  在主菜單中選中[光譜測(cè)量]項(xiàng)后,按[ENTER]鍵進(jìn)入此功能塊→根據(jù)需要設(shè)定測(cè)量模式、掃描范圍、記錄范圍、掃描速度、采樣間隔、掃描次數(shù)、顯示模式各參數(shù)。按[→]、[←]、[↑]、[↓]方向鍵到達(dá)設(shè)定行,進(jìn)行參數(shù)的修改,并按[ENTER]鍵確認(rèn)→打開樣品室蓋,將空白溶液和待測(cè)樣品分布放置比色皿架R位和S1位,關(guān)上樣品室蓋→按[F3]鍵,儀器自動(dòng)將比色皿架R位置移動(dòng)到光路中(即空白溶液),屏幕上顯示Cell=R→按[F1]鍵進(jìn)行基線校正。屏幕提示:基線校正……→按[F2]鍵,比色皿架移動(dòng)到S1位(待測(cè)樣品),屏幕上顯示Cell=S1→按[START/STOP]鍵開始光譜掃描→屏幕顯示掃描圖譜
  掃描結(jié)束后
  1)打印結(jié)果譜圖,按[F4]鍵
  2)直接讀取峰谷值,按[F2]鍵,屏幕顯示“請(qǐng)輸入峰/谷檢測(cè)靈敏度”(默認(rèn)值為3),按[ENTER]鍵確認(rèn)
  3)存儲(chǔ)圖譜,獲取整個(gè)波長(zhǎng)范圍內(nèi)的數(shù)據(jù),按[F3]鍵,用[→]、[←]方向鍵選擇10個(gè)數(shù)字和26個(gè)字母組成文件名,按[ENTER]鍵確認(rèn),按[F4]存儲(chǔ),按1-8數(shù)字鍵確定文件序列號(hào)
  4)修改譜圖坐標(biāo)范圍,按[F1]鍵。修改完畢后,按[START/STOP]鍵確認(rèn)后,譜圖將按新設(shè)定坐標(biāo)被刷新
  5)返回上一級(jí)菜單,按[MODE]鍵
  3.定量測(cè)定建立濃度曲線,直接測(cè)定樣品的濃度
  主菜單中選中[定量測(cè)定]項(xiàng)后,按[ENTER]鍵進(jìn)入此功能塊→根據(jù)需要設(shè)定測(cè)量波長(zhǎng)、測(cè)量單位、測(cè)量方法各參數(shù)。按[→]、[←]、[↑]、[↓]方向鍵到達(dá)設(shè)定行,進(jìn)行參數(shù)的修改,并按[ENTER]鍵確認(rèn)
  3.1K系數(shù)法已知斜率k和截距b,測(cè)出樣品的吸光度值后待入公式就可算出濃度值
  在測(cè)量方法中選擇K系數(shù)法,并按[ENTER]鍵確認(rèn)→按[F2]鍵,將k值和b值輸入,按[ENTER]鍵確認(rèn)→打開樣品室蓋,在當(dāng)前光路的比色皿架位中放入空白樣品,關(guān)上樣品室蓋→按[AUTOZERO]鍵調(diào)零→將樣品放入比色皿架中→按[START/STOP]鍵進(jìn)入數(shù)據(jù)測(cè)量界面→按[F2]鍵移動(dòng)比色皿架,使被測(cè)樣品處于光路中→按[START/STOP]鍵測(cè)量
  3.2單點(diǎn)標(biāo)定法測(cè)量一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)樣品的吸光度與坐標(biāo)零點(diǎn)建立工作曲線,測(cè)定未知樣品濃度
  在測(cè)量方法中選擇單點(diǎn)標(biāo)定法,并按[ENTER]鍵確認(rèn)→按[F2]鍵修改單點(diǎn)→按數(shù)字鍵輸入標(biāo)準(zhǔn)樣品的濃度值→按[ENTER]鍵→打開樣品室蓋,在當(dāng)前光路的比色皿架位中放入空白樣品,關(guān)上樣品室蓋→按[AUTOZERO]鍵調(diào)零→將空白樣品換成標(biāo)準(zhǔn)樣品→按[START/STOP]鍵測(cè)量標(biāo)樣的吸光度并顯示→將樣品放入比色皿架中→按[START/STOP]鍵進(jìn)入樣品測(cè)量界面→按[F2]鍵移動(dòng)比色皿架,使被測(cè)樣品處于光路中→按[START/STOP]鍵測(cè)量
  3.3多點(diǎn)標(biāo)定法測(cè)量已知濃度的一系列標(biāo)準(zhǔn)樣品吸光度,建立工作曲線來測(cè)定未知濃度
  在測(cè)量方法中選擇多點(diǎn)標(biāo)定法,并按[ENTER]鍵確認(rèn)→打開樣品室蓋,在當(dāng)前光路的比色皿架位中放入空白樣品,關(guān)上樣品室蓋→按[AUTOZERO]鍵調(diào)零→按[F2]鍵重新標(biāo)定→按數(shù)字鍵輸入標(biāo)準(zhǔn)樣品數(shù)→按[ENTER]鍵確認(rèn)→將標(biāo)準(zhǔn)樣品依次放入比色皿架R、S1、S2位……關(guān)上樣品室蓋→按[F3]移動(dòng)比色皿架R位到光路→按[ENTER]鍵確認(rèn)→按數(shù)字鍵輸入標(biāo)樣濃度值,按[ENTER]鍵確認(rèn)→按[START/STOP]鍵測(cè)量標(biāo)樣的吸光度→按[ENTER]鍵確認(rèn)→按[F2]鍵移樣品位S1到光路,同樣的方法測(cè)量所有標(biāo)樣的吸光度→按[F1]鍵生成方程曲線,顯示該曲線的斜率k、截距b、相關(guān)系數(shù)R→按[MODE]鍵返回定量測(cè)量菜單→按[START/STOP]鍵進(jìn)入數(shù)據(jù)測(cè)量菜單→放入樣品→按[F2]鍵移動(dòng)比色皿架,使被測(cè)樣品處于光路中→按[START/STOP]鍵測(cè)量
  6.多波長(zhǎng)測(cè)定同時(shí)測(cè)定幾個(gè)波長(zhǎng)下的透光率(T%)或吸光度值(A)
  主菜單中選中[多波長(zhǎng)測(cè)定]項(xiàng)后,按[ENTER]鍵進(jìn)入此功能塊→按[F3]鍵設(shè)定測(cè)量波長(zhǎng)數(shù)目和樣品池個(gè)數(shù),按[ENTER]鍵確定→按數(shù)字鍵輸入相應(yīng)波長(zhǎng)值→打開樣品室蓋,將空白溶液和待測(cè)樣品分布放置比色皿架R、S1、S2位……,關(guān)上樣品室蓋→按[START/STOP]鍵開始測(cè)量
  測(cè)量完成后
  1)打印輸出數(shù)據(jù),按[F4]鍵
  2)返回主菜單,按[MODE]鍵
  三、關(guān)機(jī)
  將比色皿中的溶液倒盡,然后用蒸餾水或有機(jī)溶劑沖洗比色皿至干凈,倒立晾干。關(guān)電源將干燥劑放入樣品室內(nèi),蓋上防塵罩,做好使用登記,得到管理老師認(rèn)可方可離開。
  注意事項(xiàng):
  1.開機(jī)前將樣品室內(nèi)的干燥劑取出,儀器自檢過程中禁止打開樣品室蓋。
  2.比色皿內(nèi)溶液以皿高的2/3~4/5為宜,不可過滿以防液體溢出腐蝕儀器。測(cè)定時(shí)應(yīng)保持比色皿清潔,池壁上液滴應(yīng)用擦鏡紙擦干,切勿用手捏透光面。測(cè)定紫外波長(zhǎng)時(shí),需選用石英比色皿。
  3.測(cè)定時(shí),禁止將試劑或液體物質(zhì)放在儀器的表面上,如有溶液溢出或其它原因?qū)悠凡叟K,要盡可能及時(shí)清理干凈。
  4.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后將比色皿中的溶液倒盡,然后用蒸餾水或有機(jī)溶劑沖洗比色皿至干凈,倒立晾干。關(guān)電源將干燥劑放入樣品室內(nèi),蓋上防塵罩,做好使用登記,得到管理老師認(rèn)可方可離開。
  問題處理:
  1、如果儀器不能初始化,關(guān)機(jī)重啟;如不成功,請(qǐng)向管理老師反映。
  2、如果吸收值異常,依次檢查:波長(zhǎng)設(shè)置是否正確(重新調(diào)整波長(zhǎng),并重新調(diào)零)、測(cè)量時(shí)是否調(diào)零(如被誤操作,重新調(diào)零)、比色皿是否用錯(cuò)(測(cè)定紫外波段時(shí),要用石英比色皿)、樣品準(zhǔn)備是否有誤(如有誤,重新準(zhǔn)備樣品)。
  UV-1102紫外可見分光光度計(jì)操作規(guī)程
  一、開機(jī)
  開機(jī)前將樣品室內(nèi)的干燥劑取出,確認(rèn)電源是否連接。打開儀器電源開關(guān),等待儀器自檢通過,自檢過程中禁止打開樣品室。
  二、使用
  儀器自檢結(jié)束后(7個(gè)自檢項(xiàng)目均出現(xiàn)OK字樣),按[MAINMENU]鍵(主菜單),屏幕顯示如下5個(gè)功能項(xiàng):1.Phtometry(定量運(yùn)算);2.WavelengthScan(波長(zhǎng)掃描模式);3.TimeScan(時(shí)間曲線掃描);4.System(系統(tǒng)校正);5.Datadisplay(光度直接測(cè)量模式)。按相應(yīng)選項(xiàng)前的數(shù)字鍵,即可進(jìn)入該選項(xiàng)的下一級(jí)子菜單。
  1.Phtometry(定量運(yùn)算)
  1)按[MAINMENU]鍵,再按數(shù)字[1]鍵進(jìn)入Phtometry子菜單下,選中對(duì)應(yīng)的數(shù)字來選擇所需的測(cè)定方式:①%T/ABS(透過率/吸光度測(cè)定模式);②Ratio(比例測(cè)定模式);③Concentration(濃度測(cè)定模式或標(biāo)準(zhǔn)曲線模式);
  2)按數(shù)字[1]鍵進(jìn)入%T/ABS(透過率/吸光度測(cè)定)子菜單,選中對(duì)應(yīng)的數(shù)字鍵來設(shè)定測(cè)定條件:①NUMWL(設(shè)定測(cè)試波長(zhǎng)的數(shù)目,zui多可設(shè)定6個(gè)不同波長(zhǎng));②WLSetting(設(shè)定測(cè)試波長(zhǎng)具體數(shù)值)③DataMode(選擇測(cè)定吸光度或透光率),設(shè)定完畢后點(diǎn)擊[Enter]鍵確定,所有項(xiàng)目設(shè)定完畢后按數(shù)字[0]鍵確定,等待儀器調(diào)整至準(zhǔn)備狀態(tài),此時(shí)屏幕上出現(xiàn)AUTOZERO,將盛有空白溶液的比色皿放入樣品室中,按[Start/Stop]鍵進(jìn)行零點(diǎn)的自動(dòng)調(diào)整,自動(dòng)調(diào)零完成后,將樣品置于光路中,再按[Start/Stop]鍵進(jìn)行測(cè)量,儀器的顯示屏自動(dòng)給出對(duì)應(yīng)波長(zhǎng)的數(shù)值。
  3)按數(shù)字[3]鍵進(jìn)入③Concentration(濃度測(cè)定模式或標(biāo)準(zhǔn)曲線模式),選中對(duì)應(yīng)的數(shù)字來設(shè)定條件(波長(zhǎng)數(shù)目,波長(zhǎng)數(shù)值,標(biāo)準(zhǔn)溶液數(shù)目及濃度),設(shè)定完畢后點(diǎn)擊[Enter]鍵確定,所有項(xiàng)目設(shè)定完畢后按數(shù)字[0]鍵確定,等待儀器調(diào)整至準(zhǔn)備狀態(tài),此時(shí)屏幕上出現(xiàn)AUTOZERO,將盛有空白溶液的比色皿放入樣品室中,按[Start/Stop]鍵進(jìn)行零點(diǎn)的自動(dòng)調(diào)整,自動(dòng)調(diào)零完成后,將標(biāo)準(zhǔn)溶液置于光路中,按照濃度從低到高順序依次按[Start/Stop]鍵進(jìn)行測(cè)量,測(cè)量完畢后儀器將自動(dòng)給出標(biāo)準(zhǔn)曲線,標(biāo)準(zhǔn)曲線下方有三項(xiàng)供選擇:①Process(更改標(biāo)準(zhǔn)曲線的坐標(biāo)和觀察濃度回歸曲線的數(shù)據(jù));②Measure(直接進(jìn)入樣品的測(cè)量);③Print(打印濃度回歸曲線譜圖和數(shù)據(jù)),選中對(duì)應(yīng)的數(shù)字就可執(zhí)行相應(yīng)的功能。
  4)如果希望返回上一級(jí)菜單,按[CLEARRETURN]鍵返回,返回主菜單直接按[MAINMENU]鍵。
  2.WavelengthScan(波長(zhǎng)掃描模式)
  1)參數(shù)修改:按[MAINMENU]鍵,再按數(shù)字[2]鍵進(jìn)入②WavelengthScan(波長(zhǎng)掃描模式)子菜單下,選中對(duì)應(yīng)的數(shù)字來選擇所需修改的內(nèi)容,修改掃描的起始波長(zhǎng),測(cè)量模式,圖譜坐標(biāo)的上下限,掃描速度等等。修改完畢按數(shù)字[0]鍵確定。
  2)波長(zhǎng)掃描:分別將兩個(gè)比色皿裝上空白溶液和樣品溶液,放入比色槽中,按[Start/Stop]鍵進(jìn)行譜圖掃描(如想終止掃描再次按按[Start/Stop]鍵),待儀器自動(dòng)進(jìn)行基線校正,提示拉入樣品自動(dòng)測(cè)試,測(cè)試完畢后有掃描圖譜出現(xiàn),下方有相應(yīng)的數(shù)據(jù)處理選項(xiàng)①Process②Baseline③Print;
  3)數(shù)據(jù)處理:按數(shù)字[1]鍵進(jìn)入①Process(數(shù)據(jù)處理),可以讀峰谷值,修改坐標(biāo),顯示所有數(shù)據(jù),求一階倒數(shù)等等功能。
  3.TimeScan(時(shí)間曲線掃描)同上(二)操作。
  4.System(系統(tǒng)校正),一般不做。
  5.Datadisplay(光度直接測(cè)量模式)同上(二)操作。
  三、關(guān)機(jī)
  將比色皿中的溶液倒盡,然后用蒸餾水或有機(jī)溶劑沖洗比色皿至干凈;關(guān)電源將干燥劑放入樣品室內(nèi),蓋上防塵罩,做好使用登記,得到管理老師認(rèn)可方可離開。
  注意事項(xiàng):
  1.開機(jī)前將樣品室內(nèi)的干燥劑取出,儀器自檢過程中禁止打開樣品室蓋。
  2.比色皿內(nèi)溶液以皿高的2/3~4/5為宜,不可過滿以防液體溢出腐蝕儀器。測(cè)定時(shí)應(yīng)保持比色皿清潔,池壁上液滴應(yīng)用擦鏡紙擦干,切勿用手捏透光面。測(cè)定紫外波長(zhǎng)時(shí),需選用石英比色皿。
  3.測(cè)定時(shí),禁止將試劑或液體物質(zhì)放在儀器的表面上,如有溶液溢出或其它原因?qū)悠凡叟K,要盡可能及時(shí)清理干凈。
  4.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后將比色皿中的溶液倒盡,然后用蒸餾水或有機(jī)溶劑沖洗比色皿至干凈,倒立晾干。關(guān)電源將干燥劑放入樣品室內(nèi),蓋上防塵罩,做好使用登記,得到管理老師認(rèn)可方可離開。
  問題處理:
  1、如果儀器不能初始化,關(guān)機(jī)重啟;如不成功,請(qǐng)向管理老師反映。
  2、如果吸收值異常,依次檢查:波長(zhǎng)設(shè)置是否正確(重新調(diào)整波長(zhǎng),并重新調(diào)零)、測(cè)量時(shí)是否調(diào)零(如被誤操作,重新調(diào)零)、比色皿是否用錯(cuò)(測(cè)定紫外波段時(shí),要用石英比色皿)、樣品準(zhǔn)備是否有誤(如有誤,重新準(zhǔn)備樣品)。
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